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第24章 mD质粒（第2页）

其中的重点，前中期主要以研究‘til和癌细胞中的tdna突变’与‘癌细胞的线粒体转移’为主。

待相关研究出成果后，再对‘线粒体转移后是否发生同质’和‘突变t细胞中的线粒体功能障碍’，进行深入研究。

完事儿，可以再对小白鼠为实验体的体内转移和抗肿瘤免疫力、线粒体功能和ici功效，展开扩展性的研究。

原盲盒论文中的科研团队，由于缺乏前置导向，走了很多弯路，废了不少时间。

但许星辰的课题组，却是站在了终点勾勒行经路线，完全可以直接选择最短、最好的路径去走，无疑能大大地节省时间。

……

5月23号。

许星辰在王炳涛的配合下，对相关癌细胞系的tils的tdna展开了测序，并进行了进一步的数据分析，确定相关tils中存在tdna突变。

紧接着，许星辰又建立了突变和野生tdna的tils和癌细胞的细胞系。

其中，突变细胞系为til04、tilc03和l04、lc03。野生细胞系为til02和til04、l02、l03。

通过租用仪器进行观测，许星辰发现tdna突变的细胞线粒体形态异常、嵴减少。但野生型细胞的线粒体，在形态上却是正常的。

接下来，要确定tdna突变，不是在细胞培养中发生的。

对此，许星辰设计实验，分析了相关患者的ffpe肿瘤组织。

最终的结果显示，这些组织具有相同的突变。

……

5月26号。

许星辰根据原论文中提供的思路，设计实验，制备了一种特异性荧光蛋白。

这种荧光蛋白，是一种专用于标记和定位质粒，被命名为ito-dsred，简写为d质粒，其成分主要包括红色荧光蛋白和线粒体亚基蛋白，且进行了相关的线粒体靶向序列设计。

不但可以用来将融合蛋白定位到细胞线粒体，还能在细胞内表达后靶向至线粒体并发出红色荧光。

在整篇论文中，d质粒都是一种很关键的标记物。

若没有d质粒，并非说相关实验就无法开展了，因为还有其他类型的线粒体标记物，但在这个课题中，d质粒最为适合、清晰、精准，能直接观测到线粒体转移的证据，若换其他标记物，情况就会变得十分复杂。

d质粒的制备，许星辰全程自己操作，没让任何人参与，核心的制备技术，在论文没有发表与相关专利没有进入申请流程之前，他都会将之藏着，以免被人抢占了果实。

有了这种特异性荧光蛋白，许星辰再次设计实验，对线粒体进行标记，然后引入野生型tdna的l02细胞和突变型tdna的l04细胞。

通过仪器观察，他发现，癌细胞之间的线粒体转移在20个小时之内，其实很少发生。

但是，过了20个小时以后，可以明显观察到癌细胞的线粒体，通过细胞间的隧道纳米管（tnt）或者细胞外囊泡（evs），转移到了t细胞。

针对这种现象，许星辰直接在细胞中加入细胞松弛素b、transwell、gw4869和y-27632，用以抑制tnt和阻断小evs，并避免细胞直接接触。

结果发现，这些试剂显著抑制了线粒体的转移。

……